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实验原理
DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为
2
mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为
0．14
mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
DNA不溶于95%的酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
DNA中含有脱氧核糖，能与二苯胺（沸水浴）反应生成蓝色物质，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
目的要求
1.
学会DNA的粗提取和鉴定的方法。
2.
观察提取出来的DNA物质的颜色和形状。
材料用具
材料：活鸡或鲜血鸡血。
仪器：离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100
mL，l个），烧杯（100
mL，l个，50
mL、500
mL各
2个），试管（20
mL，2个），漏斗，试管夹，纱布。
试剂：酒精的体积分数为95％的溶液（实验前置于冰箱内冷却24
h），蒸馏水，柠檬酸钠的质量浓度为
0．1g／mL的溶液，氯化钠的物质的量浓度分别为
2
mol／L和0．015
mol/L的溶液，二苯胺试剂。
方法步骤
实验前需要制备鸡血细胞液（由教师完成），制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为
0．1
g／mL的溶液（抗凝剂）100
mL，置于500
mL烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血（约180
mL）注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用
1000
r／min的离心机离。2min，此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管除去离。心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。
1．提取鸡血细胞的细胞核物质
将制备好的鸡血细胞液5
mL～10mL，注入到50
mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20
mL，同时用玻璃棒充分搅拌5
min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。取其滤液。
2．溶解细胞核内的DNA
将氯化钠的物质的量浓度为
2
mol的溶液40mL加入到滤液中，并摇动烧杯，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。
3．析出含DNA的粘稠物
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14
mol／L）。
4．滤取含DNA的粘稠物
用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至
500mL的烧杯中，含
DNA的粘稠物被留在纱布上。
5．将DNA的粘稠物再溶解
取
1个
50
mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为
2
mol／L的溶液
20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。
6．过滤含有DNA的氯化钠溶液
取1个100
mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。
7．提取含杂质较少的DNA
在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为
95％的溶液
50mL（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA
。注意观察丝状物是什么颜色的。
8．DNA的鉴定
取两支20
mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015
mol／L的溶液5
mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热
5
min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。
洋葱是中学生物实验常用材料之一，如图是与洋葱有关实验的部分步骤，请据图回答：（1）①表示提取洋葱叶
（1）破碎细胞的步骤中需加入一定量的洗涤剂和食盐对洋葱组织进行处理，加入前者是为了瓦解细胞膜结构，加入后者的目的是溶解DNA．
（2）①滤液中NaCl浓度在0.14mol/L时可分离出DNA，若要再次提纯，需要将其溶解在2mol/L的NaCl溶液中；
②通常会向DNA粗提取物中加入嫩肉粉，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能破坏其中的蛋白质；
③将得到的DNA粗提取物放在60～75℃水浴中保温10～15min，蛋白质被破坏，但仍能得到纯度较高的DNA，说明了DNA具有较高的稳定性（或耐较高温度）．
（3）步骤三中向滤液中加入DNA体积分数为95%的酒精的目的是析出DNA，依据的原理是DNA不溶于酒精，但酒精可以使蛋白质变性并与DNA分离．得到纯净的DNA后，可利用DNA与二苯胺在沸水浴条件下发生显色反应，来对其进行鉴定．
故答案为：
（1）食盐（氯化钠）溶解DNA
（2）①2（1分）?②破坏其中的蛋白质③具有较高的稳定性（或耐较高温度）
（3）析出DNADNA不溶于酒精，但酒精可以使蛋白质变性并与DNA分离二苯胺
（1）①提取洋葱叶子色素时，研钵中除了加无水乙醇外，还需加入的化学试剂有碳酸钙（保护色素）和二氧化硅（加速研磨）．②层析失败最可能的原因是层析时层析液没及滤液细线，色素溶解在层析液中．
（2）观察洋葱根尖细胞有丝分裂时装片制作的压片步骤，目的是使细胞分散开来．显微镜中成像与物体是完全倒置的，中期细胞图位于视野的右上方，所以要观察染色体的形态和数目，应向右上方移动装片．
（3）在利用洋葱提取DNA时在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤剂和食盐，洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解．然后利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同进行提纯．
（4）探究白色洋葱鳞片叶中是否含有脂肪，实验思路是制作洋葱鳞片叶切片，滴加苏丹Ⅲ染液染色并洗去浮色后，在显微镜下观察是否有橘**颗粒出现．
故答案为：
（1）碳酸钙和二氧化硅 层析时层析液没及滤液细线?
（2）使细胞分散开来? 右上?
（3）洗涤剂和食盐 不同浓度的NaCl溶液?
（4）制作洋葱鳞片叶切片，滴加苏丹Ⅲ染液染色并洗去浮色后，在显微镜下观察是否有橘**颗粒出现
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